全光譜流式細胞儀是一種先進(jìn)的流式細胞分析技術(shù),它相較于傳統流式細胞儀具有一些顯著(zhù)的優(yōu)勢,但也存在一些局限性。
一、優(yōu)點(diǎn):
1.更多的檢測通道:光譜流式細胞儀可以提供多達38個(gè)或更多的熒光檢測通道,這遠遠超過(guò)了傳統流式細胞儀的通道數。
2.光譜靈活性:由于能夠檢測400-900nm全范圍光譜,這種儀器可以檢測任何能被配置激光器激發(fā)的熒光染料,無(wú)需更換濾光片,提供了無(wú)限的靈活性。
3.高光譜分辨率:光譜流式細胞儀能夠解析和補償調節分離高度重疊的熒光團,即使在光譜重疊度很高的兩種熒光染料也可以同時(shí)使用。
4.擴展性強:可以通過(guò)增加激光器數量來(lái)進(jìn)一步擴展檢測通道,例如,配備5根激光器可以實(shí)現64個(gè)熒光檢測通道。
二、缺點(diǎn):
1.成本較高:由于其復雜的光學(xué)系統和數據處理需求,光譜流式細胞儀的成本通常高于傳統流式細胞儀。
2.操作復雜:相比于傳統流式細胞儀,光譜流式細胞儀的操作和維護可能更為復雜,需要專(zhuān)業(yè)的技術(shù)人員進(jìn)行操作和管理。
3.數據分析難度:由于數據量的大幅增加,流式細胞儀產(chǎn)生的數據分析和解釋可能需要更高級的計算工具和專(zhuān)業(yè)知識。
全光譜流式細胞儀與傳統流式之間的區別:
傳統流式和光譜流式之間的第一個(gè)重要區別是色散。傳統流式是根據波長(cháng)來(lái)阻擋、反射或傳輸光子的,而光譜流式是根據波長(cháng)來(lái)色散光子的。最常見(jiàn)的色散光學(xué)元件是棱鏡和光柵。棱鏡是一種典型的色散光學(xué)元件,它根據波長(cháng)的不同來(lái)折射光線(xiàn)。棱鏡的通量通常很高(>90%),色散發(fā)生在寬波長(cháng)范圍內,但色散是非線(xiàn)性的,光譜分辨率隨著(zhù)波長(cháng)的變化而變化,通常在可見(jiàn)光譜中變化幾納米。光柵在特定波長(cháng)下具有更高分辨率的線(xiàn)性色散,但高階衍射的存在會(huì )降低效率和通量,增加雜散光。體積相位全息光柵,在他們的最佳波長(cháng),也可以提高效率和分辨率,而且雜散光的強度較低。除了色散問(wèn)題,其他光學(xué)效應,如球面像差,也會(huì )影響性能。大多數商用攝譜儀的設計都是為了最小化這些問(wèn)題,以提供最大的光學(xué)性能。
傳統流式和光譜流式的第二個(gè)主要區別是檢測器。棱鏡或光柵產(chǎn)生的連續光譜的測量需要一個(gè)線(xiàn)性陣列的檢測器。檢測陣列的密度和間距,以及色散光學(xué)的性能,共同決定分辨率。近年來(lái),檢測技術(shù)發(fā)展迅速,目前光流式的檢測器主要有CCD和多陽(yáng)極PMT。